高效液相色譜儀(HPLC)的操作方法包括以下步驟：
準備流動相。確保流動相已經過濾，並進行超聲脫氣處理。
連線流動相管道。連線好流動相管道和檢測系統。
打開HPLC工作站。包括計算機軟體和色譜儀。
沖洗泵和進樣閥。如果長時間未使用或更換了流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。
調節流量。初次使用新的流動相時，應測試系統壓力，流速不宜超過2000，走基線觀察其穩定性。
設計走樣方法。在軟體中選取或設計一個走樣方法，包括進樣前的穩流、基線歸零、進樣閥的轉換和走樣時間。
進樣和記錄數據。選定走樣方法後，開始進樣，並記錄數據。
關機。分析完成後，先關閉檢測器，然後是泵和工作站。
填寫使用登記表。記錄HPLC的使用情況和結果。
此外，在使用HPLC時，還需要注意樣品和試劑的準備、色譜柱的檢查和安裝、樣品注入器的設定、檢測波長的選擇和柱溫的調整等。