RNA降解的原因可以歸納為以下幾個方面:
物理因素:包括溫度變化、機械剪下力、核酸的反覆凍融、高溫煮沸以及輻射等。
化學因素:如PH值的變化、水解反應和氧化反應等。
生物因素:主要是酶解作用,如核酸酶的作用,以及微生物侵染等。
實驗操作因素:
新鮮細胞:裂解液不足可能導致RNA未被充分釋放。
新鮮組織:含有內源性核酸酶的組織難以避免RNA酶的降解。
冷凍樣品:未經液氮速冷直接存放會導致RNA緩慢降解。
外源RNA酶的污染:實驗試劑、器械等應進行DEPC水滅菌處理以消除污染。
內源RNA酶的污染:抑製劑失效或用量不夠,樣品過多或勻漿溫度過高都可能導致污染。
長時間暴露於高溫或光照:RNA易受紫外線和高溫影響而降解。
提取過程中的反覆冷凍解凍:會破壞RNA結構,使其更易受酶作用而降解。
其他因素:
核酸染色異常,如28s:18s比例失真,可能導致誤判為降解。
電泳槽、電泳緩衝液、上樣緩衝液等物品污染RNA酶,導致RNA在電泳過程中降解。
RNA提取濃度過高,上樣量過大,也可能導致電泳時降解,從而誤判為RNA降解。
綜上所述,RNA降解的原因多樣,包括物理、化學、生物以及實驗操作等多種因素。在RNA提取和實驗過程中,應採取適當措施以減少RNA的降解。