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ung酶在pcr中的作用

UNG酶在PCR中的作用主要是消除含有dU(脫氧尿嘧啶核苷酸)的DNA,以保證PCR結果的準確性和特異性。

UNG酶(Uracil-N-glycosylase,尿嘧啶-N-糖基化酶)可以選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或單鏈DNA中的尿嘧啶糖苷鍵,形成缺失鹼基的DNA鏈,在鹼性介質和高溫下進一步水解斷裂,從而消除dU-DNA。在PCR反應中,如果以dUTP取代dTTP,那麼PCR產物都是含有dU的DNA鏈。在PCR開始前增加一個50℃的保溫步驟,UNG酶便能降解反應體系中已有的含dU的DNA污染物中的尿嘧啶鹼基,在隨後的變性步驟中DNA鏈會斷裂,從而消除由污染DNA產生的擴增。這保證了擴增結果的具體性和準確性。同時,UNG酶在95℃時滅活,不會再降解新擴增的產物。

此外,UNG酶對RNA無活性,主要套用於PCR擴增產物的防污染。