葡萄糖的製作方法主要有以下兩種：
從植物材料中提取。以大米或玉米為原料，通過酶解或酸水解的方法將澱粉轉化為葡萄糖。酶解方法包括將大米或玉米浸泡、磨細後，加入α-澱粉酶和氯化鈣，在特定pH值和溫度下酶解，然後加熱使澱粉糊化，加入糖化酶將澱粉轉化為葡萄糖。酸水解方法則直接加入酸來催化澱粉的水解。
工業規模生產。通常使用酶水解法，包括將玉米等糧食加工成澱粉溶液，加入糖化酶使其轉化為葡萄糖溶液，然後過濾、濃縮和烘乾得到產品。
此外，還可以通過化學反應合成葡萄糖，例如使用葡萄糖粉和食用鹽等成分配製等滲的葡萄糖鹽水。或者使用乾葡萄製作乾葡萄糖，包括清洗乾葡萄、浸泡、炒至結糖，最後淋上蜂蜜等步驟。這些方法適用於特定需求或小規模製作。