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5race和3race的原理

5'RACE(5'端cDNA末端快速擴增技術)和3'RACE(3'端cDNA末端快速擴增技術)是分子生物學中用於獲取cDNA序列5'端和3'端的有效方法。

3'RACE適用於真核生物mRNA,因為它們的3'端帶有polyA尾結構,過程如下:

使用oligo(dT)作為引物,在反轉錄酶的作用下合成第一鏈cDNA。

設計基因特異性引物,用於合成第二鏈cDNA。

使用基因特異性引物和通用錨定引對cDNA模板進行PCR擴增,從而獲得3'端序列。

5'RACE則相對複雜,因為大多數mRNA的5'端沒有特定的標記。其過程如下:

根據已知的cDNA序列設計基因特異性引物,在反轉錄酶的作用下生成第一鏈cDNA。

使用末端轉移酶在cDNA的3'端加入連續的脫氧胞嘧啶核苷酸

RNA酶降解模板中的mRNA,純化第一鏈cDNA。

連有oligo(dG)的引物合成第二鏈cDNA。

最後以基因特異性引物和帶有oligo(dG)的錨定引為一對引物,進行PCR擴增,以期得到大量的mRNA 5'端序列。

通過這兩種技術,可以獲得cDNA的完整序列,從而有助於研究基因的結構和表達。