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blue native page原理

Blue Native PAGE(BN-PAGE)是一種用於分析蛋白質-蛋白質相互作用和膜蛋白質複合物的電泳技術,其原理可以概括如下:

樣品準備:使用溫和的去污劑(如digitonin)從細胞膜中分離蛋白複合體,保持這些複合體在近似天然的狀態。

染色劑使用:考馬斯亮藍G-250用於替代SDS與蛋白結合,從而使蛋白帶上負電荷。這樣,染料-蛋白複合體形成藍色條帶,便於在PAGE膠中觀察。

電泳分離:由於考馬斯亮藍G-250的存在,蛋白都覆蓋上負電荷,使得鹼性蛋白(pI>7)能夠在電泳中遷移。蛋白的分離基於其分子量的不同,在PAGE膠中得到分離。

解析度和範圍:Blue Native PAGE的分離範圍為100KDa至10MDa,適合於分析分子量較大的蛋白質複合物。

後續分析:在蛋白質複合物得到分離後,可以通過切下第一向的泳道進行第二向SDS-PAGE,以進一步分離各個複合物的亞基。這樣,可以更詳細地研究蛋白質的相互作用和複合物的組成。

Blue Native PAGE相比其他電泳技術,如Clear Native PAGE(CN-PAGE),在解析度和適用範圍上有所不同。BN-PAGE由於考馬斯亮藍G-250的存在,可以分離鹼性蛋白,而CN-PAGE則適合於酸性蛋白的分離。