使用Primer Premier軟體設計PCR引物的步驟如下：
打開Primer Premier軟體。
創建新項目。點擊File，選擇New，然後選擇DNA Sequence（如果是蛋白質序列則選擇Protein Sequence）。
輸入或貼上序列。將目標DNA序列貼上到軟體的工作視窗中。如果序列較長，可能需要將其分為不同的部分，如上游UTR、CDS和下游UTR。
設定引物搜尋參數。點擊Primer，然後選擇Search，將出現引物設計參數對話框。在這裡，需要設定引物搜尋範圍、PCR產物大小、引物長度等參數。
尋找引物。點擊OK開始尋找合適的引物。尋找完成後，軟體會列出符合條件的引物信息。
選擇和編輯引物。根據Tm值、髮夾結構、引物二聚體、錯配等情況選擇最佳的引物對。可以使用軟體提供的工具調整引序列，最佳化引物的性能。
保存和分享引物信息。編輯完成後，將引物信息複製並保存到Word或Excel中，以便於分享和合成。
使用合成的引物進行PCR實驗。將選定的引物序列傳送給引物合成公司。收到引物後，按照標準的PCR實驗流程進行操作。