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sscp原理

SSCP(單鏈構象多態性,Single-Strand Conformation Polymorphism)是一種用於檢測DNA序列變異的分子生物學技術。其基本原理如下:

PCR擴增:首先,利用PCR(聚合酶鏈式反應)技術擴增目的DNA片段。在擴增過程中,可以通過引物標記法或鹼基摻入法使擴增的產物帶有標記,如螢光物質、同位素、生物素等,以便於後續的檢測和可視化。

單鏈DNA的形成:擴增後的DNA片段經過變性處理,成為單鏈DNA。這些單鏈DNA在中性聚丙烯醯胺凝膠中電泳時,會形成不同的立體構象。

電泳分離:在非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)中,由於單鏈DNA的立體構象差異,其電泳遷移速率也會不同。這種差異主要是由於鹼基序列的變異導致的構象改變。因此,通過PAGE可以將構象上有差異的DNA分子分離開來。

檢測變異:通過電泳,可以觀察到不同的泳動帶,這些帶型的變化反映了DNA單鏈的立體構象差異。即使是相同長度的DNA單鏈,核苷酸順序中單個鹼基的差異也可能導致立體構象的不同,從而在電泳中顯示出不同的泳動速率。

SSCP技術的優點在於它無需經特殊的限制性內切酶作用,可以直接對PCR擴增產物或其他方法製備的DNA片段進行分離,從而測出單鏈的突變點。