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taqman probe原理

TaqMan探針是一種用於基因診斷個體化藥物分析的寡核苷酸探針。它的核心原理是利用Taq酶的5'→3'外切核酸酶活性。在PCR擴增反應中,除了加入一對引物外,還加入一個特異性的螢光探針。探針的5'端標記有報告基團,而3'端標記有螢光淬滅基團。當探針完整時,報告基團發出的螢光信號被淬滅基團吸收,因此儀器檢測不到信號。

隨著PCR的進行,Taq酶在鏈延伸過程中遇到與模板結合的探針,其5'→3'外切核酸酶活性就會將探針切斷,使報告基團遠離淬滅基團,其能量不被吸收,從而產生螢光信號。因此,每經過一個PCR循環,螢光信號也和目的片段一樣,有一個同步指數增長的過程。信號強度就代表了模板DNA的拷貝數。

TaqMan探針法是一種高度特異性的定量PCR技術,其核心是利用Taq酶的5'→3'外切核酸酶活性,切斷探針,產生螢光信號。由於探針與模板是特異性結合,所以螢光信號的強弱就代表了模板的數量。

此外,還有一種新型TaqMan-MGB探針,它不僅可以進行基因定量分析,還可以分析基因突變(SNP),因此有望成為基因診斷和個體化藥物分析的首選技術平台。