計算引物的熔解溫度（Tm）時，可以使用不同的公式，具體取決於引物的長度。對於長度為25個鹼基對（mer）以下的引物，通常使用以下公式：
Tm = 4℃(G + C) + 2℃(A + T)
這個公式是基於引物中鳥苷（G）和胞苷（C）的數量，以及腺苷（A）和胸腺苷（T）的數量來計算的。
對於更長的寡聚核苷酸，可以使用以下公式：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
在這個公式中，size指的是引物的長度。
需要注意的是，這些公式提供的是大致的估計，實際的Tm值可能會因為引序列的具體組成、鹽離子濃度、pH值等因素而有所不同。在實驗中，為了得到更精確的Tm值，通常需要使用專門的儀器進行熔解曲線分析。