夜光粉的使用方法因套用領域而異，以下是一些常見的使用方法：
陶瓷產品。一般推薦使用110目的夜光粉。可以將夜光粉作為普通色料使用，與油性印油混合後充分攪拌，避免使用金屬容器以防變色。攪拌後，使用80目網進行印刷，增加印刷次數可以增強發光效果。
塗料和油漆。將夜光粉與透明樹脂或油漆混合，攪拌均勻。螢光夜光粉的配比一般為1份夜光粉比10份膠水或油漆，磷光夜光粉則為1份夜光粉比5份膠水或油漆。
手工藝術。將夜光粉與透明膠水或油漆混合，塗抹於手工作品上，用攪拌棒抹平。螢光夜光粉無需充電，磷光夜光粉可用光線激活。
塑膠製品。將夜光粉與塑膠原料混合，比率一般在2%至10%之間，具體取決於所需顏色深淺。
在使用夜光粉時，應注意其特性，如避免長時間暴露於高溫或高速摩擦下，以及避免與水或酸性物質接觸，以保持其發光性能。此外，夜光粉的發光效果與其粒度和濃度有關，使用時需根據具體需求調整。