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裂解液配置

裂解液的配置取決於實驗的目的和細胞類型。以下是幾種常見的裂解液配置方法:

RIPA裂解液。這是一種常用的細胞裂解液,適用於蛋白質提取和分析。配置方法為在150 mM NaCl、1% NP-40(去垢劑)、0.1% SDS(去垢劑)的溶液中,加入2 ug/ml的Aprotinin(蛋白酶抑製劑)和2 ug/ml的Leupeptin(蛋白酶抑製劑)。還可以添加1 mM PMSF(蛋白酶抑製劑)、1.5 mM EDTA(蛋白酶抑製劑)和1 mM NaVanadate(磷酸脂酶抑製劑)。這些試劑均需按比例溶於150 mM NaCl溶液中,並在冰上操作。

組織裂解液。適用於組織樣本的裂解,配方為7M Urea、4.2042 g 2M Thiourea、1.5224 g 100mM DTT、0.1543 g 4% CHAPS、0.4 g 0.5mM EDTA、0.00146 g 40Mm Tris、0.0485 g 2% NP-40、0.2 ml 1% Triton X-100、5mM PMSF。這些試劑需按比例混合,分裝成小份供實驗使用。

細胞裂解液。適用於細胞樣本的裂解,配方為6M Urea、1.8018 g 2M Thiourea、0.7613 g 65mM DTT、0.050 g 4% CHAPS、0.2 g 40Mm Trisbase。這些試劑需按比例混合,分裝成小份供實驗使用。

每種裂解液都有其特定的用途和配方,選擇時應考慮實驗的具體需求。